細(xì)胞背景介紹

RAW264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞），是由加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立的，是最常見的炎癥細(xì)胞模型之一^[1]。RAW264.7細(xì)胞一般為圓形或橢圓形，顏色較深，貼壁牢固。RAW264.7細(xì)胞具有較強(qiáng)的吞噬能力，在吞噬抗原后，細(xì)胞會釋放出趨化因子，促使分化，細(xì)胞伸出偽足，攀爬能力增強(qiáng)。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)條件惡劣或傳代后細(xì)胞稀疏等情況，都會使細(xì)胞呈現(xiàn)出梭形、長梭形的形態(tài)，消化難度增加。

 

THP-1細(xì)胞系是從一名患有急性單核細(xì)胞白血病的1歲小男孩的外周血中分離得到的，自1980年建系以來，THP-1細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制、免疫和炎癥信號通路等研究中。THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，相比于ML-2、HL-60、U937等白血病細(xì)胞系，THP-1細(xì)胞具有更接近于人原代單核細(xì)胞的形態(tài)和功能特征（包括細(xì)胞分化標(biāo)記）。并且相對于人外周血單核細(xì)胞（PBMC），THP-1更易在實驗室中培養(yǎng)和擴(kuò)增，且具有更穩(wěn)定的基因背景，不存在PBMC的個體差異性問題，利于實驗結(jié)果的重現(xiàn)。因此，THP-1是各大實驗室常用的急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系，是研究免疫和炎癥的理想工具。

 

細(xì)胞用途--誘導(dǎo)分化
 

RAW264.7細(xì)胞

RAW264.7被廣泛應(yīng)用于破骨細(xì)胞的研究，在具體的誘導(dǎo)RAW264.7向破骨細(xì)胞分化的實驗中，主要用到的誘導(dǎo)因子是RANKL，同時最好選擇低傳代代數(shù)的RAW264.7細(xì)胞，當(dāng)代數(shù)超過20代時，RANKL幾乎無效。

破骨細(xì)胞具有骨吸收(bone resorption)的功能，破骨細(xì)胞功能異常會造成骨質(zhì)吸收的異常，若其功能亢進(jìn)，會引起骨退行性病變?nèi)绻琴|(zhì)疏松癥、癌癥的骨轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)炎等；若其功能障礙或衰退，會造成骨硬化癥、致密性成骨不全、Pagets病、大塊骨溶解病等。因此借助RAW264.7的可誘導(dǎo)分化能力，加深對破骨細(xì)胞的研究，能夠幫助我們更好的對相關(guān)疾病進(jìn)行預(yù)防和治療。

 

THP-1細(xì)胞

在科學(xué)研究中，THP-1細(xì)胞常被誘導(dǎo)分化為M1和M2型巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞，用于炎癥的研究。在具體的誘導(dǎo)分化實驗中，THP-1首先被佛波酯（PMA）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，隨后進(jìn)行下一步實驗：

I    誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞：通過脂多糖（LPS）和IFN-γ誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)生M1型極化，釋放出TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子，這是經(jīng)典的炎癥模型。

I    誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞：通過 IL-4 、IL-13和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)生M2型極化，分泌TGF-β、IL-10等抑制性細(xì)胞因子，模擬炎癥后期的組織修復(fù)和重建的過程。

I    粥樣硬化慢性炎癥模型：在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的作用下，巨噬細(xì)胞可進(jìn)一步形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化形成的早期事件，屬于慢性炎癥模型。

細(xì)胞特性及培養(yǎng)注意事項

RAW264.7細(xì)胞 

狀態(tài)正常的細(xì)胞是開展科研的基礎(chǔ)！養(yǎng)過RAW264.7細(xì)胞的小伙伴們一定都會發(fā)現(xiàn)，這株細(xì)胞非常容易分化，影響細(xì)胞狀態(tài)和后續(xù)實驗，那我們應(yīng)該如何合理培養(yǎng)這株細(xì)胞呢？I  RAW264.7細(xì)胞對胰酶不敏感，細(xì)胞傳代時推薦使用細(xì)胞刮刀。I  RAW264.7細(xì)胞通常會連片生長，散布在培養(yǎng)瓶/皿中。傳代時，保證中等密度接種，調(diào)整細(xì)胞傳代比例，避免因細(xì)胞過稀導(dǎo)致生長緩慢等情況的發(fā)生。
I  培養(yǎng)時注意觀察細(xì)胞形態(tài)，當(dāng)發(fā)生細(xì)胞由圓形或橢圓形變?yōu)樗慕切危蛏斐鰝巫愕惹闆r時，說明細(xì)胞狀態(tài)改變，需及時傳代，以免產(chǎn)生不可靠的實驗數(shù)據(jù)。 

‍THP-1細(xì)胞 

 THP-1細(xì)胞比較敏感，培養(yǎng)時要小心操作，保證培條件的穩(wěn)定，讓我們來看一下培養(yǎng)過程中的細(xì)節(jié)和注意事項吧！I  THP-1細(xì)胞在酸性環(huán)境中生長速度較快，當(dāng)培養(yǎng)基呈橘紅色時，適宜細(xì)胞生長。培養(yǎng)基中需添加β巰基乙醇。I  THP-1細(xì)胞對血清品質(zhì)要求較高，推薦使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清。
I  THP-1細(xì)胞具有密度依賴性，培養(yǎng)密度較低時細(xì)胞生長緩慢。
I   THP-1細(xì)胞傳代采取半換液法，搖勻細(xì)胞后，均分到兩個瓶子里，每瓶再補(bǔ)加等量培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞碎片較多時，采取離心法按比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)中。
I  THP-1細(xì)胞易受凍存影響，因此應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好時凍存，并適量增加凍存的細(xì)胞量，以提高復(fù)蘇存活率。
I  THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天的時間恢復(fù)狀態(tài)，建議復(fù)蘇后48小時不要接觸細(xì)胞，晃動培養(yǎng)瓶/皿，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。   

細(xì)胞接收后常見問題

Q：收貨后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變？
A：受運(yùn)輸?shù)挠绊懀?xì)胞培養(yǎng)條件改變，細(xì)胞會出現(xiàn)暫時的形態(tài)改變的情況，后續(xù)改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，傳代并穩(wěn)定培養(yǎng)后，細(xì)胞可恢復(fù)正常的形態(tài)。

Q：RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇注意事項？
A：RAW264.7細(xì)胞對空間狀態(tài)很敏感，復(fù)蘇后及時觀察細(xì)胞生長密度，當(dāng)密度達(dá)到70%-80%時進(jìn)行傳代。
 

Q：細(xì)胞生長緩慢？
A：細(xì)胞傳代時，如果匯合度較低，會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢。因此可通過減小培養(yǎng)面積、增加細(xì)胞接觸等方式提高細(xì)胞密度，促進(jìn)細(xì)胞生長。

Q：THP-1細(xì)胞發(fā)生貼壁現(xiàn)象？
A：少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液重新接種到新的培養(yǎng)瓶/皿中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞比例超過20%，說明細(xì)胞生長狀態(tài)異常，需要排查細(xì)胞培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的各種問題。

Q：THP-1細(xì)胞出現(xiàn)聚團(tuán)生長的情況？
A：少量細(xì)胞聚團(tuán)生長屬于正常現(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時容易發(fā)生。建議更換血清品牌，并適量提高完全培養(yǎng)基中的血清比例（不超過20%），當(dāng)細(xì)胞密度增加后，聚團(tuán)現(xiàn)象將自發(fā)改善。

Q：收貨后RAW264.7貼壁性差？
A：RAW264.7細(xì)胞有一定的聚團(tuán)生長的特性，聚團(tuán)后不容易貼壁。可以離心收集細(xì)胞，隨后用1mL培養(yǎng)基重懸，輕柔吹打直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。