(ATCC)

【RRID】：CVCL_0320

【生長(zhǎng)特性】：貼壁生長(zhǎng)

【培養(yǎng)體系】：McCoy's 5a(CellCook cat:CM2002,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別)

【傳代比例】：1:3傳代（培養(yǎng)面積比）

【傳代方式】：消化3-5分鐘（用0.25%含EDTA胰酶）

【換液頻率】：2~3天換液1次

【凍存配方】：McCoy's 5a+10%FBS+10%DMSO

【難度等級(jí)】：++

培養(yǎng)操作

 

 

【傳代】：

?：Step 1：當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)80%時(shí)傳代；

?：Step 2：將舊培養(yǎng)液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘（鏡下觀察細(xì)胞變圓、間隙增大），待細(xì)胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后加入含血清培養(yǎng)基終止消化，將消化下來(lái)的細(xì)胞收集到離心管中；

?：Step 3：1000rpm離心5分鐘，重懸后接種至新培養(yǎng)瓶。

【凍存】：

?：Step 1：細(xì)胞匯合度80%以上，活力狀態(tài)較好時(shí)，可消化收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行凍存。

?：Step 2：細(xì)胞沉淀用適量 4 °C 凍存液【McCoy's 5a(含10%胎牛血清)+10%DMSO】重懸， 一瓶 T25 細(xì)胞凍存2管（1ml/管），梯度降溫（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮長(zhǎng)期保存）或使用程序降溫盒降溫后再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。凍存管需標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)、代次、凍存日期。若使用無(wú)血清細(xì)胞凍存液可省去程序降溫步驟，直接轉(zhuǎn)入-80℃保存，但仍建議在-80℃放置24小時(shí)后再轉(zhuǎn)移至液氮。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用方法與使用效果參考下文鏈接→《無(wú)血清凍存液PK常規(guī)凍存液》

【復(fù)蘇】：

?：Step 1：液氮取出的細(xì)胞放入干冰或液氮中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞房，提前準(zhǔn)備好相關(guān)試劑耗材。

?：Step 2：取出凍存管置于室溫?fù)]發(fā)液氮30s（如放入干冰轉(zhuǎn)移則不需要揮發(fā)液氮），再轉(zhuǎn)移到 37 °C 水浴中迅速解凍（1分鐘內(nèi)）。為了減少污染的可能性，保持凍存管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍存管外壁。

?：Step 3：將含細(xì)胞的凍存液轉(zhuǎn)移到含 4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，1000rpm離心5min去除DMSO ，重懸后接種（建議每個(gè) T25 培養(yǎng)瓶添加 6-8ml 完全培養(yǎng)基）轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中靜置培養(yǎng)，24小時(shí)后更換培養(yǎng)基（去除死亡細(xì)胞）。復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)避免移動(dòng)培養(yǎng)瓶，以促進(jìn)貼壁。

培養(yǎng)要點(diǎn)

 

 

1

一般情況下細(xì)胞差不多長(zhǎng)滿時(shí)按1:3進(jìn)行傳代，生長(zhǎng)周期為3-4天。

2

細(xì)胞傳代時(shí)放培養(yǎng)箱參考消化3-5min（消化時(shí)長(zhǎng)以具體消化情況為準(zhǔn)），適當(dāng)控制消化時(shí)間，避免消化不充分靠吹打強(qiáng)行讓細(xì)胞脫落分散或消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。

3

本株細(xì)胞貼壁較慢，傳代后需要靜置貼壁1-2天，期間減少移動(dòng)；細(xì)胞正常生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)有少量漂浮細(xì)胞碎片和黑點(diǎn)，不需要過(guò)度換液。

4

細(xì)胞呈島狀成簇聚集生長(zhǎng)，正常培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生少量黑點(diǎn)和漂浮細(xì)胞碎片。

5

T25培養(yǎng)瓶長(zhǎng)滿通常可以?xún)龃?管，10cm皿長(zhǎng)滿可以?xún)龃?管；復(fù)蘇初期可能會(huì)有大量漂浮細(xì)胞，可在48h后更換培養(yǎng)液時(shí)將漂浮細(xì)胞收集回原瓶。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

 

腸道腫瘤機(jī)制研究

作為結(jié)腸腺癌的代表性細(xì)胞株，HT29細(xì)胞常用于研究Wnt/β-catenin、PI3K/Akt等信號(hào)通路在結(jié)腸腫瘤發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制

抗腫瘤藥物篩選

可用于評(píng)估化療藥物（如5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑）、靶向藥物及中藥提取物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)作用，是藥物研發(fā)的重要體外模型

腸道炎癥與屏障功能研究

HT29細(xì)胞可與Caco-2細(xì)胞共培養(yǎng)構(gòu)建腸道屏障模型，用于研究炎癥因子、益生菌代謝產(chǎn)物對(duì)腸道上皮屏障通透性的影響，助力炎癥性腸病的治療研究

 

細(xì)胞分化機(jī)制研究

在誘導(dǎo)劑作用下，HT29細(xì)胞可分化為具有功能的腸上皮細(xì)胞，常用于探索腸道細(xì)胞分化的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為干細(xì)胞分化研究提供參考

【CELLCOOK賽庫(kù)生物HT29細(xì)胞系部分引用文獻(xiàn)】

●Yuan J, Li G, Zhong F, et al. SALL1 promotes proliferation and metastasis and activates phosphorylation of p65 and JUN in colorectal cancer cells[J]. Pathology-Research and Practice, 2023, 250: 154827.

●Zhu D, Yuan S, Chen C. Hedyotis diffusa–Sculellaria barbata (HD–SB) suppresses the progression of colorectal cancer cells via the hsa_circ_0039933/hsa-miR-204-5p/wnt11 axis[J]. Scientific Reports, 2023, 13(1): 13331.

●Yu Q. Comprehensive Exploration of SERPINA1 and Alternative Splicing Events within the Goblets in Colorectal Cancer: Implications for Mucin Secretion and Prognosis[D]. Carnegie Mellon University, 2024.

●Li J, Lv J, Chen Y, et al. Tumor suppressor circPDE4D inhibits the progression of colorectal cancer and regulates oxaliplatin chemoresistance[J]. Gene, 2023, 864: 147323.

●Bao M, Li S, Zhu Y, et al. CHL1 inhibits cell proliferation, migration and invasion by regulating the NFκB signaling pathway in colorectal cancer[J]. Experimental and Therapeutic Medicine, 2024, 27(4): 165.

本文所述方法僅供參考，具體操作需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件優(yōu)化。