HT-22（小鼠海馬神經(jīng)元細胞）是從HT-4細胞系亞克隆而來的永生小鼠海馬細胞系，親代HT-4細胞系來源于帶有溫度敏感SV40 T抗原的小鼠神經(jīng)元組織的永生化；該細胞系保留了海馬神經(jīng)元的部分特性，是研究神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)保護機制的理想模型。

【RRID】：CVCL_0321

【生長特性】：貼壁生長

【培養(yǎng)體系】：DMEM,high glucose(CellCook cat:CM2016,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)

【傳代比例】：1:3-1:4傳代（培養(yǎng)面積比）

【傳代方式】：消化2-3分鐘（用0.25%含EDTA胰酶）

【換液頻率】：2~3天換液1次

【凍存配方】：DMEM,high glucose+10%FBS+10%DMSO

【難度等級】：+

培養(yǎng)操作

 

 

【傳代】：

?：Step 1：當細胞匯合度達80%時傳代；

?：Step 2：將舊培養(yǎng)液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘（鏡下觀察細胞變圓、間隙增大），待細胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后加入含血清培養(yǎng)基終止消化，將消化下來的細胞收集到離心管中；

?：Step 3：1000rpm離心5分鐘，重懸后接種至新培養(yǎng)瓶。

【凍存】：

?：Step 1：細胞匯合度80%以上，活力狀態(tài)較好時，可消化收集細胞沉淀進行凍存。

?：Step 2：細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液【DMEM,high glucose(含10%FBS)+10%DMSO】重懸， 一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），梯度降溫（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時→-80℃過夜→液氮長期保存）或使用程序降溫盒降溫后再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。凍存管需標記細胞名稱、代次、凍存日期。若使用無血清細胞凍存液可省去程序降溫步驟，直接轉(zhuǎn)入-80℃保存，但仍建議在-80℃放置24小時后再轉(zhuǎn)移至液氮。

無血清細胞凍存液使用方法與使用效果參考下文鏈接→《無血清凍存液PK常規(guī)凍存液》

【復蘇】：

?：Step 1：液氮取出的細胞放入干冰或液氮中轉(zhuǎn)移到細胞房，提前準備好相關(guān)試劑耗材。

?：Step 2：取出凍存管置于室溫揮發(fā)液氮30s（如放入干冰轉(zhuǎn)移則不需要揮發(fā)液氮），再轉(zhuǎn)移到 37 °C 水浴中迅速解凍（1分鐘內(nèi)）。為了減少污染的可能性，保持凍存管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍存管外壁。

?：Step 3：將含細胞的凍存液轉(zhuǎn)移到含 4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，1000rpm離心5min去除DMSO ，重懸后接種（建議每個 T25 培養(yǎng)瓶添加 6-8ml 完全培養(yǎng)基）轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中靜置培養(yǎng)，24小時后更換培養(yǎng)基（去除死亡細胞）。復蘇后24小時內(nèi)避免移動培養(yǎng)瓶，以促進貼壁。

培養(yǎng)要點

 

 

1

本株細胞生長較快，培養(yǎng)難度不大，細胞匯合度達80%可根據(jù)細胞生長情況1:3-1:4進行傳代，生長周期2-3天。

2

細胞貼壁性相對弱一些，培養(yǎng)過程中易出現(xiàn)細胞漂浮，換液時盡量緩慢輕柔沿培養(yǎng)瓶壁或邊緣吸液加液，如果漂浮細胞較多可在傳代時把漂浮部分細胞一起收集，可考慮使用包被過的培養(yǎng)器皿重新鋪板。

3

細胞消化吹打和重懸時需要注意控制吹打力度，不要過于激烈或吹出太多氣泡，以免細胞出現(xiàn)機械損傷導致培養(yǎng)狀態(tài)變差。

4

HT22細胞較易凍存，使用我司推薦凍存配方或無血清凍存液測試凍存復蘇效果較好，貼壁率90%以上。

 

 

應(yīng)用領(lǐng)域

 

 

神經(jīng)退行性疾病研究

-阿爾茨海默病、帕金森病模型建立

-神經(jīng)元凋亡與神經(jīng)保護機制研究

神經(jīng)毒理學研究

-興奮性毒性(谷氨酸毒性)機制研究

-重金屬和環(huán)境毒素對神經(jīng)細胞的影響

藥物篩選

- 神經(jīng)保護藥物高通量篩選

- 中藥有效成分的神經(jīng)保護作用評估

 

細胞信號通路研究

- MAPK、PI3K/Akt等信號通路在神經(jīng)細胞中的作用

- 氧化應(yīng)激與細胞存活機制研究

 

本文所述方法僅供參考，具體操作需結(jié)合實驗室條件優(yōu)化。