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NK（Natural killer）細胞，也稱自然殺傷細胞，因為其非專一性的細胞毒殺作用而被命名。形態(tài)上屬于大顆粒淋巴細胞，來源于骨髓，是除T細胞、B細胞之外的第三大類淋巴細胞，約占血液中所有免疫細胞(白細胞數(shù)量)的15%，屬于天然免疫系統(tǒng)的核心細胞，主要分布于外周血、肝臟和脾臟。

NK細胞具有部分T細胞分化抗原，如80%~90%的NK細胞呈CD2⁺，以及75%~90%的NK細胞呈CD38⁺，而且NK細胞具有IL-2中親和性受體，在IL-2刺激下可發(fā)生增殖反應(yīng)，活化的NK細胞可產(chǎn)生IFN-γ。NK細胞是人體抵抗癌細胞和病毒感染的第一道防線，可非特異性識別并消除腫瘤細胞，這種天然殺傷活性無MHC限制，也不需要抗體參與。除了具有強大的殺傷功能外，NK細胞還具有很強的免疫調(diào)節(jié)功能，與機體其他多種免疫細胞相互作用，調(diào)節(jié)機體的免疫狀態(tài)和免疫功能。

圖片來源于網(wǎng)絡(luò)

細胞背景介紹

NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2（IL-2）依賴型的NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和DAUDI細胞。NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。

NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。

NK-92/MI細胞，是通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA對NK-92進行轉(zhuǎn)化，得到的IL-2非依賴的NK細胞株。

NK92：100X；200X

細胞特性及培養(yǎng)注意事項

細胞特點

細胞偏圓或偏橢圓，透亮，成團生長。只有成團的細胞有增殖活性，單個的細胞基本沒有增殖活力。細胞團可生長成肉眼可見的大團塊，死了的細胞會皺縮，不再透亮而變得灰暗。細胞對氧氣、養(yǎng)分及細胞密度非常敏感，養(yǎng)分不夠或密度太高情況下，細胞很容易凋亡。

細胞培養(yǎng)技巧

1、細胞剛復(fù)蘇或密度較低時：可以把培養(yǎng)瓶立起來培養(yǎng)，以提高細胞密度，促進細胞聚團。當(dāng)細胞聚團正常生長后，建議平躺著培養(yǎng)該細胞，以增大空氣交換面積，且液體高度最好不要超過3mm，一般T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基，T75培養(yǎng)瓶加15ml左右培養(yǎng)基即可。

2、換液：2-3天換液一次。

半換液法：換液時輕輕側(cè)過培養(yǎng)瓶/皿，避免晃動細胞，用巴氏吸管輕輕吸取部分上清棄去，補加等體積的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；

離心法：將全部培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min，吸去上清后用新鮮培養(yǎng)輕輕重懸后重新種瓶，重懸時不可吹打過度。

3、傳代：細胞團長至肉眼可見，且T25瓶子有幾十上百個小團時，細胞數(shù)量已經(jīng)比較多，此時應(yīng)該2天換液一次。當(dāng)一個20倍視野有4-5個大細胞團時應(yīng)該進行傳代。傳代時加入兩倍體積的新鮮培養(yǎng)基后，輕輕吹打細胞團，將大的細胞團打散成小團，但不要劇烈吹打成單細胞懸液，因為單個的細胞是基本沒有增殖活力的細胞，然后將混勻的細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中。或者將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min后，棄去上清，加入三倍體積的新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸后轉(zhuǎn)移至三個新的培養(yǎng)瓶中。

4、吹打操作注意事項：細胞團塊需要吹散，但不用刻意吹散成單顆；正常傳代或者離心換液后吹打，控制吹打次數(shù)以及力度，即使細胞都分散成單個，也會在1~2天內(nèi)聚集起來；建議只在細胞產(chǎn)生大量碎片時才離心清洗。

5、復(fù)蘇：復(fù)蘇時可適當(dāng)加大胎牛血清的含量，以使細胞盡快長起來。復(fù)蘇后細胞需要重新聚團，故復(fù)蘇時間較長，期間應(yīng)多加觀察，并注意更換培養(yǎng)基，頻率為3天一換（半換液法）。

NK-92和NK-92MI的區(qū)別