HepG2 2.2.15是抗HBV新藥開發(fā)的一個(gè)良好的體外研究工具。該細(xì)胞株是用2個(gè)頭尾相連的HBV-DNA全基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞HepG2而成，可在體外無限繁殖，能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定的向培養(yǎng)上清中分泌乙肝病毒表面抗原HBsAg，乙肝病毒e抗原HBeAg和完整的Dane顆粒，而且還能產(chǎn)生大量的復(fù)制中間體，是體外篩選抗HBV藥物的良好模型。
圖1：HepG2 2.2.15細(xì)胞的形態(tài)圖
生長(zhǎng)特性：與HepG2類似，上皮樣呈片狀的小島形態(tài)，容易抱團(tuán)聚集疊加生長(zhǎng)
培養(yǎng)條件：MEM+10%胎牛血清（南美/澳洲級(jí)別）+1×非必需氨基酸+380ug/mL G418
傳代比例：1:3傳代，3-4天傳代一次
傳代方式：0.25%（含EDTA）胰酶消化5分鐘，若細(xì)胞團(tuán)較大可在細(xì)胞團(tuán)脫落后輕輕吹散細(xì)胞繼續(xù)消化1-2分鐘
倍增時(shí)間：50-60 hours（DSMZ）
凍存液配方：完全培養(yǎng)基+10%DMSO
培養(yǎng)難點(diǎn)：細(xì)胞有堆疊生長(zhǎng)的特性，消化后需要兩天貼壁至完全攤開
圖2：賽庫生物HepG2 2.2.15細(xì)胞生產(chǎn)出庫圖
1.血清：HepG2 2.2.15對(duì)血清品質(zhì)要求更高，建議用南美或澳洲級(jí)別的胎牛血清培養(yǎng)。
2.細(xì)胞堆疊生長(zhǎng)：細(xì)胞呈緊密連接的片狀，堆疊生長(zhǎng)屬于正常現(xiàn)象。因此所需消化時(shí)間較久，在消化過程中，耐心等待細(xì)胞自然脫落，切勿拍打培養(yǎng)瓶或者過度吹打細(xì)胞，避免細(xì)胞損傷。
3.貼壁慢、漂浮細(xì)胞多：與Hep G2一樣，HepG2 2.2.15復(fù)蘇/傳代后需要2-3天的時(shí)間才能完全貼壁伸展開，建議在此期間不要挪動(dòng)細(xì)胞，讓細(xì)胞充分貼壁后再進(jìn)行觀察。
參考文獻(xiàn)：
1.Sells MA, Chen ML, Acs G. Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.Proc Natl Acad Sci USA.1987 Feb;84(4):1005-9.
doi: 10.1073/pnas.84.4.1005. PMID: 3029758; PMCID: PMC304350.
2.Ogura N, Ogawa K, Watashi K, Ito T, Wakita T. Novel stable HBV producing cell line systems for expression and screening antiviral inhibitor of hepatitis B virus in human hepatoma cell line. Biochem Biophys Res Commun. 2018 Mar 25;498(1):64-71.
doi: 10.1016/j.bbrc.2018.02.175. Epub 2018 Feb 24. PMID: 29481805.
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