以HCEC-B4G12
人角膜內(nèi)皮細胞為例
圖1/2：DSMZ中HCEC-B4G12的細胞形態(tài)
培養(yǎng)條件
Human-Endothelial-SFM，10ng/mL FGF-2b（bFGF）
傳代方法
1:3傳代；消化2-3分鐘
倍增時間
40-50 hours（DSMZ）
凍存液配方
完全培養(yǎng)基+10%DMSO
培養(yǎng)難點
部分細胞存在空泡，屬于細胞正常特性
使用配套無血清培養(yǎng)基Human-Endothelial-SFM培養(yǎng)，注意效期。
消化條件：無鈣、鎂離子的PBS清洗細胞后，使用0.25%胰酶+EDTA消化，具體方法為加500uL-1mL胰酶，胰酶潤洗細胞表面3-4次后，吸走胰酶，放入37度培養(yǎng)箱消化2分鐘。（具體消化時間請在拿到細胞前2次傳代時，及時觀察，以實際情況為主）
終止消化時，用1mL胰蛋白酶抑制劑（1mg/mL）終止，離心去上清，然后用3mL PBS再次清洗細胞，離心收集后，用新的培養(yǎng)基重懸后鋪板。（消化過程中，不要拍瓶身，振蕩可促使細胞聚團。）
培養(yǎng)器皿提前使用包被液（10 µg/mL Fibronectin，10 mg/mL 硫酸軟骨素）處理，促進細胞貼壁。包被時間至少4小時，建議過夜，室溫或37度培養(yǎng)箱包被。可提前包被幾個瓶子備用，包被后限一個月內(nèi)使用。（包被液使用方法：加2-3mL到T25培養(yǎng)瓶或3-4mL到10cm培養(yǎng)皿，放培養(yǎng)箱中，擰上蓋子，自然風(fēng)干。使用時，未風(fēng)干的包被液槍頭吸走即可，然后加1-2mL PBS清洗表面，吸走PBS后即可接種細胞。）
Valtink, M., Gruschwitz, R., Funk, R. H., & Engelmann, K. (2008). Two clonal cell lines of immortalized human corneal endothelial cells show either differentiated or precursor cell characteristics. Cells, tissues, organs, 187(4), 286–294.
https://doi.org/10.1159/000113406
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