巨噬細(xì)胞（macrophage，Mφ）是天然免疫系統(tǒng)特化的具有吞噬作用的細(xì)胞，是第一道防線的重要組成部分。Mφ參與細(xì)胞碎片和病原體的識(shí)別、吞噬和降解，并且在向T細(xì)胞提呈抗原以及誘導(dǎo)其他抗原呈遞細(xì)胞表達(dá)共刺激分子等方面發(fā)揮作用。

Mφ的命運(yùn)取決于各種環(huán)境條件，這些環(huán)境條件會(huì)引發(fā)典型的促炎M1極化或抗炎M2極化。M1或M2極化是一個(gè)精確調(diào)控的過程，包括幾個(gè)關(guān)鍵的信號(hào)通路、轉(zhuǎn)錄表觀遺傳和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。Mφ通常存在于兩個(gè)不同的亞群：

1) 經(jīng)典激活或M1巨噬細(xì)胞：它們是促炎細(xì)胞，并被LPS單獨(dú)或與Th1細(xì)胞因子(如IFN-γ，GM-CSF)聯(lián)合極化，并產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1β (IL-1β)， IL-6, IL-12, IL-23和TNF-α；

2) 交替激活或M2型巨噬細(xì)胞：具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，被Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-13極化，產(chǎn)生IL-10和TGF-β等抗炎細(xì)胞因子。

作為一種常用的巨噬細(xì)胞模型，RAW264.7 極化可模擬向 M1（促炎）或 M2（抗炎）表型分化，用于研究免疫應(yīng)答、炎癥疾病及藥物作用機(jī)制。通過極化能明確細(xì)胞在不同微環(huán)境下的功能變化，為疾病病理機(jī)制和治療靶點(diǎn)篩選提供體外研究基礎(chǔ)。

M0（未極化）、M1（經(jīng)典激活）和M2（替代激活）型巨噬細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上具有相對(duì)顯著的的區(qū)別，顯微鏡下可觀察到以下特征：

lM0（靜息狀態(tài)）：形態(tài)較規(guī)則、呈圓形或橢圓形、細(xì)胞直徑中等（約10–15μm）、表面光滑、偽足稀疏且短。

lM1（促炎極化）：明顯增大（可達(dá)20μm以上）、形狀不規(guī)則、偽足發(fā)達(dá)（寬板狀偽足或絲狀偽足）、細(xì)胞邊緣呈“阿米巴樣”皺褶、提示高運(yùn)動(dòng)性和吞噬活性。

lM2（抗炎/修復(fù)極化）：大小介于M0與M1之間、形態(tài)更細(xì)長(zhǎng)（紡錘形或星狀）、偽足細(xì)長(zhǎng)且分支多、類似成纖維細(xì)胞樣外觀、表面皺褶較少、整體伸展。

在科研界，RAW264.7 細(xì)胞可是出了名的難養(yǎng)—— 溫度、pH 值稍有偏差就愛 “罷工”，尤其是血清質(zhì)量，直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和極化。畢竟血清里藏著生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、激素和營養(yǎng)成分…

為了進(jìn)一步探究血清對(duì)RAW264.7 細(xì)胞的影響，我們找到市面熱銷的8款不同品牌、不同產(chǎn)地的胎牛血清，測(cè)試它們培養(yǎng)RAW264.7 的效果。

測(cè)試方法

 

 

將RAW264.7細(xì)胞以1×10?/孔接種于6孔板，分別使用8款血清（10%濃度，DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基）培養(yǎng)48小時(shí)（37℃、5% CO?），通過顯微鏡（200X）觀察細(xì)胞形態(tài)。

測(cè)試結(jié)果

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

要想 RAW264.7 細(xì)胞養(yǎng)的好，血清質(zhì)量是繞不開的關(guān)鍵！實(shí)驗(yàn)前先試用不同血清，篩選出最適合的那一款，培養(yǎng)過程中盡量使用同一批次血清，能讓你的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)事半功倍。