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            技術(shù)資訊技術(shù)資料
            貼壁懸浮混合型細(xì)胞--培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)
            發(fā)布日期:2023.05.06

             

            細(xì)胞類型有三種:貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、貼壁懸浮混合型細(xì)胞。

             

             

            01
            貼壁懸浮混合型細(xì)胞

            是指在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,部分細(xì)胞貼壁生長,部分細(xì)胞懸浮生長,稱為貼壁懸浮混合型細(xì)胞。

             
            02
            常見的貼壁懸浮混合型細(xì)胞

            LLC(小鼠Lewis肺癌細(xì)胞)、BV2(小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞)、PC3(人前列腺癌細(xì)胞)、NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)、SP2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)、COLO 205(人結(jié)腸癌細(xì)胞)等。

             

             

             
            Cellcook BV2細(xì)胞圖片
             

             

            圓形細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,不規(guī)則型細(xì)胞為貼壁細(xì)胞。

             
             
             
            Cellcook COLO 205細(xì)胞圖片
             

            大部分圓形懸浮細(xì)胞,少量圓形貼壁細(xì)胞。
             


            細(xì)胞培養(yǎng)

             

             

             

            補(bǔ)液/換液

            補(bǔ)液:細(xì)胞量較少時直接補(bǔ)加1-2mL新鮮的完全培養(yǎng)基即可。

            換液:細(xì)胞量較多但不夠傳代時,2-3天離心換液一次。
             

             

             
            傳代
             

            用移液槍吸出培養(yǎng)液(含懸浮的細(xì)胞)轉(zhuǎn)移到無菌離心管中;

            貼壁部分:用1mL PBS洗細(xì)胞,吸出PBS放入到第1步裝有培養(yǎng)液的離心管中收集(不要直接丟棄,里面有細(xì)胞);

            加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液,傾斜晃勻,吸去大部分胰酶,覆蓋所有細(xì)胞后置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化,具體消化時間參考說明書結(jié)合細(xì)胞生長情況而定。

            顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞皺縮變圓后,傾斜培養(yǎng)瓶,細(xì)胞呈流沙狀完全脫落,即可判斷細(xì)胞消化完成。

            用2mL完全培養(yǎng)基終止消化,沿瓶壁將細(xì)胞輕柔吹落,均勻吹散。將消化下來的細(xì)胞懸液吹散細(xì)胞后收集到第1步的離心管;

            將離心管在1000rpm 5min離心,離心完畢棄掉上清,加入新鮮的完全培養(yǎng)基重懸,按實(shí)際情況分瓶,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

             

             

             


            注意事項(xiàng)

             

             

             

             
            01

            在操作過程中,丟棄一個液體前都要想一下里面有沒有可能有細(xì)胞,避免丟失細(xì)胞。

             
            02

            細(xì)胞種類、細(xì)胞密度、細(xì)胞狀態(tài)、甚至胰酶的品牌,均影響到細(xì)胞的消化時間,所以消化的時候不要只看時間,以顯微鏡下細(xì)胞的狀態(tài)來確定消化終點(diǎn),部分難消化的細(xì)胞消化時間甚至可以長達(dá)15分鐘。

             
             
            03

            細(xì)胞的傳代比例通常說的是等體積的容器,不同容器需要換算;例如:一個T25培養(yǎng)瓶的細(xì)胞傳到一個10cm培養(yǎng)皿里面,雖然是1傳1,但是比例可不是1:1;T25瓶底面積25cm²,10cm培養(yǎng)皿底面積約為55cm²(10cm的培養(yǎng)皿指的是培養(yǎng)皿的外徑,而培養(yǎng)皿的內(nèi)徑約為8.4cm,故根據(jù)內(nèi)徑可求出其底面積為55cm²),所以實(shí)際傳代比例為1:2.2。

             

             

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