左圖：賽庫生物 L929(200X) 

右圖：賽庫生物 L929(100X）

（ATCC）

【RRID】：CVCL_0462

【別名】：NCTC 929; NCTC-929; NCTC929; NCTC-929L; L cell; L cells; L-cell; L-cells; L cell line; L; Strain L-929; L-929; L 929; L929; L929(NCTC); Clone 929; Earles's cells; Earle's L cells

【生長特性】：成纖維細胞樣，貼壁生長

【培養(yǎng)體系】：MEM(CellCook cat:CM2015,或同配方) 10%馬血清(CellCook cat:CM1001) 添加劑:1X 非必需氨基酸(CellCook cat:CM1008S/L)

【傳代比例】：1:3傳代（培養(yǎng)面積比）

【傳代方式】：消化2-3分鐘（用0.25%含EDTA胰酶）

【換液頻率】：2~3天換液1次

【凍存配方】：MEM+10%馬血清+1X 非必需氨基酸+10%DMSO

【難度等級】：++

（來源于ATCC）

培養(yǎng)操作

 

 

【傳代】：

?：Step 1：當細胞匯合度達80%時傳代；

?：Step 2：將舊培養(yǎng)液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘（鏡下觀察細胞變圓、間隙增大），待細胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后加入含血清培養(yǎng)基終止消化，將消化下來的細胞收集到離心管中；

?：Step 3：1000rpm離心5分鐘，重懸后接種至新培養(yǎng)瓶。

【凍存】：

?：Step 1：細胞匯合度80%以上，活力狀態(tài)較好時，可消化收集細胞沉淀進行凍存。

?：Step 2：細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液【MEM(含10%馬血清)+10%DMSO】重懸， 一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），梯度降溫（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時→-80℃過夜→液氮長期保存）或使用程序降溫盒降溫后再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。凍存管需標記細胞名稱、代次、凍存日期。若使用無血清細胞凍存液可省去程序降溫步驟，直接轉(zhuǎn)入-80℃保存，但仍建議在-80℃放置24小時后再轉(zhuǎn)移至液氮。

無血清細胞凍存液使用方法與使用效果參考下文鏈接→《無血清凍存液PK常規(guī)凍存液》

【復(fù)蘇】：

?：Step 1：液氮取出的細胞放入干冰或液氮中轉(zhuǎn)移到細胞房，提前準備好相關(guān)試劑耗材。

?：Step 2：取出凍存管置于室溫揮發(fā)液氮30s（如放入干冰轉(zhuǎn)移則不需要揮發(fā)液氮），再轉(zhuǎn)移到 37 °C 水浴中迅速解凍（1分鐘內(nèi)）。為了減少污染的可能性，保持凍存管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍存管外壁。

?：Step 3：將含細胞的凍存液轉(zhuǎn)移到含 4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，1000rpm離心5min去除DMSO ，重懸后接種（建議每個 T25 培養(yǎng)瓶添加 6-8ml 完全培養(yǎng)基）轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中靜置培養(yǎng)，24小時后更換培養(yǎng)基（去除死亡細胞）。復(fù)蘇后24小時內(nèi)避免移動培養(yǎng)瓶，以促進貼壁。

培養(yǎng)要點

 

 

【CELLCOOK賽庫生物L(fēng)929細胞系部分引用文獻】

●Du W, Jiang Y, Yan M, et al. Fabrication and evaluation of hybrid foam fire-extinguishing agent reinforced with nano-zirconia sol[J]. Journal of Sol-Gel Science and Technology, 2025: 1-9.

●Liu L, Luo H, Xie Y, Wang Y, Ren S, Sun H, Li D. IL-33/ST2 signalling promotes tumor growth by regulating polarization of alternatively activated macrophages. Cancer Biol Med. 2025 Mar 27;22(4):376–95. doi: 10.20892/j.issn.2095-3941.2024.0483. PMID: 40145895; PMCID: PMC12032832.

●Zhou H, Zhang X, Li B, et al. Fast and efficient identification of hyaluronidase specific inhibitors from Chrysanthemum morifolium Ramat. using UF-LC-MS technique and their anti-inflammation effect in macrophages[J]. Heliyon, 2023, 9(2).

●Luo Y, Xiong B, Liu H, Chen Z, Huang H, Yu C, Yang J. Koumine Suppresses IL-1β Secretion and Attenuates Inflammation Associated With Blocking ROS/NF-κB/NLRP3 Axis in Macrophages. Front Pharmacol. 2021 Jan 18;11:622074. doi: 10.3389/fphar.2020.622074. PMID: 33542692; PMCID: PMC7851739.

●Xu S, Yu Y, Zhang B, et al. Boron carbide nanoparticles for boron neutron capture therapy[J]. RSC advances, 2025, 15(14): 10717-10730.

●Su Q, Wei D, Dai W, et al. Designing a castor oil-based polyurethane as bioadhesive[J]. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 2019, 181: 740-748.

本文所述方法僅供參考，具體操作需結(jié)合實驗室條件優(yōu)化。