【培養(yǎng)體系】：DMEM/F12(CellCook cat:CM2012,或同配方)+ 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別)；或配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC9007M)

【傳代比例】：1:3傳代（培養(yǎng)面積比）

【傳代方式】：先收集懸浮細(xì)胞，再用0.25%含EDTA胰酶消化1-2分鐘收集貼壁細(xì)胞

【換液頻率】：2~3天換液1次

【凍存配方】：DMEM/F12 +10%FBS+10%DMSO

【難度等級(jí)】：++

【形態(tài)特性】：貼壁懸浮混合型細(xì)胞，貼壁懸浮比例不固定。懸浮細(xì)胞為圓形，貼壁細(xì)胞多呈現(xiàn)圓形、梭形、多邊形等不規(guī)則形態(tài)

? ：BV2細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)條件較敏感，需要使用品質(zhì)好一些的血清，日常培養(yǎng)需注意培養(yǎng)基顏色變化，培養(yǎng)液明顯變黃則看情況及時(shí)換液，培養(yǎng)液偏紫需要檢查CO2供應(yīng)情況。

?：BV2細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)細(xì)胞觸角變多、細(xì)胞貼壁牢固消化時(shí)間明顯變長(zhǎng)、細(xì)胞增殖越來(lái)越慢甚至是停止生長(zhǎng)的情況提示細(xì)胞分化，可在傳代時(shí)將貼壁異常牢固難消化的細(xì)胞直接丟棄，保留未分化部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)幾代看是否有改善。

? ：細(xì)胞貼壁懸浮比例不固定，如果圓形細(xì)胞數(shù)量較少則需要確定是否存在傳代或換液時(shí)忘記收集而損失了懸浮部分細(xì)胞或綜合細(xì)胞形態(tài)變化及生長(zhǎng)活力等情況綜合判斷是否分化嚴(yán)重。傳代時(shí)注意消化時(shí)間和吹打力度，消化過(guò)度或者吹打太劇烈易刺激細(xì)胞分化或?qū)е录?xì)胞破碎損傷。

相關(guān)模型誘導(dǎo)

 

 

（來(lái)源：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25800044/）

       在經(jīng)典的 M1 狀態(tài)下，暴露于 LPS 和/或 IFN-γ 會(huì)分別刺激 TLR4 或 IFN-γ 受體 1 與 2，從而激活轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB 和 STAT1，并上調(diào) CD86 和 MHC-II 的表達(dá)。iNOS 的增加會(huì)產(chǎn)生大量活性氮（RNS），并釋放促炎細(xì)胞因子，如 IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12、IL-23，以及趨化因子 CCL2、CCL20，還有受體 CCR2、具有膠原結(jié)構(gòu)的巨噬細(xì)胞受體（MARCO）和 COX2。

       M2 狀態(tài)可由多種刺激因素誘導(dǎo)形成。例如，在 IL-4/IL-13 刺激下，IL-4 受體（IL-4R）的結(jié)合會(huì)啟動(dòng) STAT6 激活，使細(xì)胞向抗炎表型轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為 Arg-1 增加，CD206 和甘露糖受體（MR）表達(dá)上調(diào)，并釋放抗炎因子（IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-1RA、FIZZ1 和 PPARγ）。細(xì)胞暴露于 IL-10 后，通過(guò)刺激 IL-10 受體 1 和 2 主要激活 STAT3，使細(xì)胞進(jìn)入主要的免疫抑制狀態(tài)，表現(xiàn)為 CD206 的表達(dá)及 IL-10、TGF-β、FIZZ1 和 PPARγ 的釋放。

實(shí)驗(yàn)分組：分為對(duì)照組、OGD/R處理組。

細(xì)胞準(zhǔn)備：將BV2細(xì)胞接種于合適的培養(yǎng)器皿中，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

誘導(dǎo)處理：

- 氧糖剝奪：將細(xì)胞培養(yǎng)基更換為無(wú)糖培養(yǎng)基，并置于無(wú)氧環(huán)境中，37℃孵育3h。

- 再恢復(fù)：結(jié)束氧糖剝奪后，將細(xì)胞培養(yǎng)基換回正常完全培養(yǎng)基，置于正常培養(yǎng)環(huán)境（37℃、5% CO?）中再?gòu)?fù)氧培養(yǎng)24h。

檢測(cè)指標(biāo)：

- 細(xì)胞活力檢測(cè)：采用CCK - 8法或MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，評(píng)估OGD/R處理對(duì)細(xì)胞存活的影響 。

- 凋亡檢測(cè)：通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，觀察細(xì)胞凋亡情況 。

- 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)：檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量等氧化應(yīng)激指標(biāo)，了解細(xì)胞的氧化損傷程度 。

應(yīng)用研究

 

 

神經(jīng)炎癥研究

模擬小膠質(zhì)細(xì)胞活化過(guò)程、檢測(cè)炎癥因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6)表達(dá)、研究炎癥信號(hào)通路(如NF-κB、MAPK)

神經(jīng)退行性疾病模型

阿爾茨海默病(Abeta處理)、帕金森病(MPTP/MPP+處理)、肌萎縮側(cè)索硬化癥、亨廷頓舞蹈癥等

神經(jīng)損傷與修復(fù)

缺血性腦損傷模型、創(chuàng)傷性腦損傷研究、神經(jīng)修復(fù)與再生機(jī)制

藥物篩選與開(kāi)發(fā)

抗炎藥物評(píng)價(jià)、神經(jīng)保護(hù)劑篩選、血腦屏障通透研究

細(xì)胞信號(hào)與功能研究

小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能、細(xì)胞凋亡與自噬、氧化應(yīng)激反應(yīng)

病毒與感染研究

神經(jīng)病毒感染模型、病毒與宿主相互作用

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本文所述方法僅供參考，具體操作需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件優(yōu)化。