商品詳情
【培養(yǎng)條件】
RPMI 1640(CellCook cat:CM2017,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)
【推薦培養(yǎng)試劑】
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC0209M)
【傳代比例】
1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
懸浮部分離心收集(1000rpm,5分鐘),貼壁部分消化2-3分鐘
【換液頻率】
每周換液2-3次
【凍存液配方】
RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO
【難度等級】
++
【培養(yǎng)要點】
懸浮與貼壁混合,需要將培養(yǎng)基中的懸浮細胞與消化完成的貼壁細胞一并離心收集再做傳代
【特征特性】
該細胞是1982年由Carney D和Gazdar AF等從一位小細胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細胞的原始形態(tài)并不具有小細胞肺癌特征。這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種,表達神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶;左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達到可檢測水平。與正常細胞相比,該細胞c-myc DNA序列擴增約20倍,RNA增加15倍。最初傳代培養(yǎng)基用含有5%FBS的RPMI1640,另外添加10 nM氫化可的松、0.005 mg/ml胰島素、0.01 mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進細胞基因組,使細胞表達熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進行觀察,標記后的細胞非常容易進行追蹤檢測。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細胞熒光表達量的不確定性,為增強細胞熒
光表達量可進行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。